科研产出
BrCTL1基因增强白菜型冬油菜抗寒性
《干旱地区农业研究 》 2025 北大核心 CSCD
摘要：通过显微镜观察强抗寒冬油菜叶片几丁质酶蛋白冰晶形态,分析其编码基因家族冷胁迫下的表达模式.克隆几丁质酶基因(BrCTL1),进行亚细胞定位与过表达载体构建,测定过表达株系低温胁迫下生理变化及基因低温表达模式.结果表明,在冷胁迫环境下,从强抗寒白菜型冬油菜叶片中提取的蛋白液,具备显著的重结晶抑制活性,有效抑制冰晶生长,同时含有高活性的抗冻蛋白.SDS-PAGE电泳将该蛋白鉴定为几丁质酶(chitinase,CTL1).同源克隆油菜BrCTL1(Brapa08T003472.1)基因,其ORF全长963 bp,编码321个氨基酸,BrCTL1蛋白被定位在叶绿体上.低温胁迫下,BrCTL1基因过表达植株形态无明显变化,突变体与野生型植株出现明显冻害症状,过表达拟南芥株系SOD、POD、CAT活性较野生型分别提高20%、17%、48%,CTL1突变体则分别降低65%、32%、67%.低温胁迫下,BrCTL1过表达株系相对电导率和MDA含量较野生型分别降低19%和45%,CTL1突变体分别提高9.4%和5.7%.综上,BrCTL1基因能够显著增强转基因拟南芥植株的抗寒性.
关键词： BrCTL1基因 白菜型冬油菜 抗冻蛋白 几丁质酶 低温胁迫 抗寒性
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腐熟羊粪有机肥配施化肥对青稞田土壤肥力及产量的影响
《华东师范大学学报(自然科学版) 》 2025 北大核心 CSCD
摘要：为研究腐熟羊粪作为有机肥与化肥配施对青稞田土壤肥力及产量的影响,在拉萨市农区试验基地进行了青稞种植常规施肥.通过增施氯化钾和腐熟羊粪,适量减施尿素和磷酸二铵,设置 4个不同处理进行田间试验,分别为常规施肥处理T1(羊粪 5 250 kg/hm2+尿素 180 kg/hm2+磷酸二铵 180 kg/hm2)、T2(羊粪 5 250 kg/hm2+尿素 150 kg/hm2+磷酸二铵 120 kg/hm2+氯化钾 30 kg/hm2)、T3(羊粪 10 500 kg/hm2+尿素150 kg/hm2+磷酸二铵120 kg/hm2+氯化钾30 kg/hm2)和T4(羊粪15 750 kg/hm2+尿素135 kg/hm2+磷酸二铵 75 kg/hm2+氯化钾 30 kg/hm2).研究结果表明,不同施肥模式下,土壤有机质、全氮和全钾的含量均表现为收获后比种植前有所下降;在T1处理下,全磷和有效磷的含量较种植前有所增加;在T3处理下,腐熟羊粪作为有机肥与化肥配施,速效氮、磷、钾的含量和pH值在收获后比种植前略有所增加;在T1和T4处理下,成熟期青稞的株高和生物产量积累较高.随着腐熟羊粪有机肥替代化肥比例的升高,青稞产量呈现先增加后下降的变化趋势,在T3处理下,化肥替代率为16.67%时青稞产量最高,达5 323.65 kg/hm2.腐熟羊粪作为有机肥与化肥配施有利于改善青稞田土壤的供肥能力,提高青稞产量.该项研究可为西藏青稞田种植中合理施肥、减少农田面源污染提供参考.
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基于线粒体cox2基因的细粒棘球绦虫RPA-CRISPR/Cas12a检测方法的建立
《中国预防兽医学报 》 2025 北大核心 CSCD
摘要：为建立灵敏、特异的细粒棘球绦虫即时核酸检测方法，本研究结合重组酶聚合酶扩增技术（RPA）和CRISPR/Cas12a系统，以细粒棘球绦虫线粒体细胞色素c氧化酶亚基2(cox2)基因为靶标，设计5条RPA正向引物和5条反向引物，并根据确定的原间隔相邻基序（PAM）设计合成7条CRISPR RNA(crRNA:cox2-1/2/3/4/5/6/7)，初步建立了细粒棘球绦虫RPA-CRISPR/Cas12a单管检测方法，并通过荧光结果筛选出最佳RPA扩增引物及最佳crRNA。利用建立的方法分别检测细粒棘球绦虫、多房棘球绦虫、带状泡尾绦虫、贝氏莫尼茨绦虫、犬复孔绦虫、犬弓首蛔虫和肝片吸虫共7种寄生虫DNA，评估该方法的特异性，结果显示，该方法仅可特异性检测细粒棘球绦虫DNA，其他寄生虫DNA检测结果均为阴性，且可在20 min内得到检测结果；将重组质粒标准品稀释至1 000拷贝/μL、500拷贝/μL、100拷贝/μL、50拷贝/μL、10拷贝/μL、1拷贝/μL，分别作为模板经建立的方法检测，结果显示，该方法对重组质粒标准品的检测限可达50拷贝/μL；以检测限浓度的质粒标准品为模板，采用所建立的方法于不同时间检测，每次做两组平行对照，共做3次，评估该方法的重复性，结果显示，6组试验的荧光值差异较小。表明本研究建立的方法特异性强、敏感性高、重复性好。利用该方法对62份临床犬粪便样品检测，结果显示细粒棘球绦虫的阳性率约为0.16%(1/62)，与qPCR的检测结果相符。本研究建立了RPA-CRISPR/Cas12a单管检测方法，并对次优PAM和次优结构的crRNA进行了优化，该方法可在短时间内完成特异、灵敏地检测，有望成为细粒棘球绦虫终末宿主现场筛查的新型替代检测工具。
关键词： 细粒棘球绦虫 核酸扩增检测 重组酶聚合酶扩增技术 CRISPR/Cas12a crRNA cox2基因
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西藏青稞田入侵杂草曼陀罗适用除草剂的筛选
《植物保护 》 2025 北大核心 CSCD
摘要：为了筛选能有效防除西藏青稞田中曼陀罗Datura stramonium的防除药剂，本研究通过田间试验测定10%唑草酮可湿性粉剂、560 g/L灭草松水剂、80%唑嘧磺草胺水分散粒剂和10%氟唑磺隆可分散油悬浮剂4种除草剂对曼陀罗的株防效、鲜重防效。结果显示，曼陀罗对10%唑草酮可湿性粉剂和560 g/L灭草松水剂表现出较高敏感性。药后21 d, 10%唑草酮可湿性粉剂对曼陀罗的株防效可达92.59%,560 g/L灭草松水剂对曼陀罗的株防效在85.56%～89.26%之间；两者对曼陀罗的鲜重防效均高于94.44%。综合考虑株防效和鲜重防效，西藏青稞田中可选用10%唑草酮可湿性粉剂20 g/667m2和560 g/L灭草松水剂100 mL/667m2。
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牛甲状腺基因的功能及其与环境适应性的相关研究进展
《中国农业科学 》 2025 北大核心 CSCD
摘要：甲状腺是牛重要的内分泌器官，通过分泌甲状腺激素（thyroid hormone,TH）发挥生物学作用，具有促进营养代谢、生长发育、完善神经功能和调控生理机能等功能。甲状腺的多功能性对动物维持健康机体必不可缺，在动物的生长发育和环境适应过程中影响深远。中国地方黄牛的遗传背景复杂，又经过各地长期杂交选育，形成了至少58个地方品种。为适应多样化的地理生态环境，中国黄牛基因组在扩散过程中产生不断的微进化，其中甲状腺相关基因可能在适应性方面发挥了重要作用。本文从动物生理学和基因组学角度，综述了近年来甲状腺调控功能与相关基因组遗传变异的研究进展。首先介绍甲状腺调控功能，甲状腺通过负反馈调节的方式动态调控体内的TH水平，进而调控动物的发育、代谢、节律和繁殖功能。甲状腺信号对于环境影响十分敏感，可对环境刺激做出相应的反应，主要体现在低温时增加产热、高温时减少内源性产热、调控免疫和神经细胞等抵抗疾病及其他不利因素。其次介绍目前甲状腺相关基因组遗传变异的研究进展，TH合成到发挥作用是一个复杂的过程，大量的基因参与了该过程的调控，部分基因的遗传变异对动物的健康与家畜的生产性能产生影响。近年来牛基因组相关研究发展迅速，对牛的起源、生产和抗逆性状相关基因的研究均有深入探讨。随着对牛基因组研究的深入，更多的牛甲状腺相关基因的新功能被挖掘出来。甲状腺相关基因对牛生长、代谢、环境适应等的关键性状均有影响，例如：DUOXA2参与了奶牛的细胞钙调节和西藏牛的高原适应性，其Leu20Pro变异对青藏高原黄牛具有潜在影响；TG是肉牛生产性状相关的关键调控基因之一，存在3个与公牛性成熟相关的SNPs，可显著降低公牛性成熟年龄。最后，本文展望了基因组重组测序技术和单细胞核转录组与染色质可及性测序技术在牛甲状腺相关基因遗传变异研究中的巨大潜力，从成本、作用以及应用实例等角度论证两种技术的可行性。基因组重测序可鉴定多种类型的变异位点，根据选择信号鉴定关键变异。单细胞核转录组与染色质可及性测序技术可直接研究在不同环境和发育阶段每个细胞内基因的表达差异，可用于验证关键调控基因的作用机理。探究牛甲状腺相关基因的功能及其与生长性能和环境适应性相关遗传变异，有利于进一步挖掘牛重要经济性状和抗逆性状新基因。本文介绍了甲状腺的调控机制和甲状腺相关基因对家畜生长、代谢、生物节律调控、繁殖功能以及环境适应的多方面影响，并对未来可用于甲状腺研究的新技术进行展望，以期为未来的甲状腺功能探究和牛生物育种提供参考。
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不同类型油菜资源农艺性状鉴定及聚类分析
《作物杂志 》 2025 北大核心 CSCD
摘要：为探明不同类型油菜资源的农艺性状特性,并筛选具有优良性状的材料作为核心种质资源,以55份不同类型油菜资源为试验材料,进行生育期、株高、分枝数、千粒重和单株产量等 13个农艺性状的表型评价、相关性分析和聚类分析.结果表明,不同类型油菜生育天数的变异系数较小,均低于 20%,而主序角果数、单株角果数和单株产量的变异系数均高于 20%;相关性分析表明,3种类型油菜各性状之间的相关性基本一致,主序角果数、角果密度、千粒重与产量形成密切关联.在欧式距离为 10处,可将 55份油菜资源聚为4 个类群,类群Ⅰ的D亚群为大粒甘蓝型油菜资源;类群Ⅱ各农艺性状表现较优,是选育高产油菜新品种(系)的优良材料;类群Ⅲ角果密度大,角果数多,是多角果亲本的较优材料;类群IV为肥用油菜资源.筛选出的大粒、高产型、多角果及高生物量种质可为油菜性状改良提供理论依据和资源材料.
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玉米赤霉烯酮致彭波半细毛羊睾丸支持细胞增殖凋亡、氧化应激及NAC保护机制
《畜牧兽医学报 》 2025 北大核心 CSCD
摘要：旨在研究玉米赤霉烯酮（zearalenone, ZEA）对彭波半细毛羊睾丸支持细胞的生殖毒性及N-乙酰半胱氨酸（NAC）对睾丸支持细胞抗氧化应激的保护机制。本试验选取体质健康3月龄雄性彭波半细毛羊(（13.87±0.46） kg)的睾丸组织用以分离支持细胞进行体外染毒试验，试验组ZEA染毒剂量分别为25、50、100、200μmol·L-1,对照组（NC组）仅添加0.1%DMSO,每组3个重复，筛选ZEA试验浓度。采用组合酶消化法、差速贴壁法和免疫荧光染色（IF）法进行彭波半细毛羊睾丸组织支持细胞分离、纯化培养及特异性抗体GATA4和Vimentin鉴定。CCK-8法、EdU法检测睾丸组织支持细胞活率及增殖能力。qRT-PCR和Western blot技术从转录和翻译水平检测细胞增殖（pcna）、凋亡（bax、caspase3、caspase9）和氧化应激（cat、gsh-px、sod1）等相关基因和蛋白的表达变化规律以及NAC的保护作用。结果发现，组合酶消化法和差速贴壁法能够获得满足ZEA染毒试验的SCs,随ZEA染毒浓度升高，SCs细胞活性和细胞增殖数量逐渐下降，200μmol·L-1 ZEA处理组SCs活性和细胞增殖数量极显著低于NC组（P<0.01）;细胞增殖基因pcna的mRNA相对表达量和蛋白表达量均极显著低于NC组（P<0.01）;促凋亡相关基因bax、caspase3、caspase9的mRNA相对表达量极显著高于NC组（P<0.01）,CASPASE3蛋白表达量极显著高于NC组（P<0.01）,BAX、CASPASE9蛋白表达量显著高于NC组（P<0.05）;抗凋亡基因bcl-2的mRNA相对表达量和蛋白表达量显著低于NC组（P<0.05）;氧化应激相关基因gsh-px和sod1的mRNA相对表达量极显著高于NC组（P<0.01）,cat的mRNA相对表达量显著高于NC组（P<0.05）,CAT、SOD1蛋白表达量极显著于NC组（P<0.01）。N-乙酰半胱氨酸（NAC）预处理后，与NC组对比，试验组cleaved-CASPASE-9、cleaved-CASPASE-3蛋白表达量极显著下降（P<0.01）,BAX蛋白表达量显著下降（P<0.05）,BCL-2蛋白表达量显著上升（P<0.05）。综上表明，ZEA暴露能够对彭波半细毛羊产生生殖毒性，抑制睾丸SCs增殖，促进SCs凋亡，导致SCs发生氧化损伤，而NAC对ZEA诱导的彭波半细毛羊睾丸SCs氧化损伤具有保护作用。
关键词： 彭波半细毛羊 玉米赤霉烯酮 睾丸 支持细胞 增殖凋亡 氧化应激 N-乙酰半胱氨酸
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五个杜鹃品种耐热性评价及大鸳鸯锦杜鹃对高温胁迫的生理响应
《湖北农业科学 》 2025 北大核心
摘要：为探究不同品种杜鹃（Rhododendron simsii Planch.）耐热性及大鸳鸯锦杜鹃对高温胁迫的生理响应机制，计算5个东洋杜鹃品种大鸳鸯锦、胭脂蜜、珊瑚粉牡丹、烈火、爱丁堡半致死温度及高温叶片褐变指数，进行聚类分析，并对大鸳鸯锦杜鹃进行不同温度胁迫处理，研究其在高温胁迫下的生理指标变化。结果显示，5个杜鹃品种可分为3个类群：第Ⅰ类群中，大鸳鸯锦为强耐热品种；第Ⅱ类群包括珊瑚粉牡丹、胭脂蜜和爱丁堡，这些为半耐热品种；第Ⅲ类群为较耐热品种烈火。大鸳鸯锦在不同高温胁迫条件下表现出不同的生理响应，随着高温胁迫程度的增大，叶片MDA含量在轻、中度胁迫下上升，重度胁迫7 d后迅速下降；可溶性糖含量在轻、中、重度胁迫下呈持续上升、先降后升、先升后降趋势，脯氨酸含量在中度胁迫下显著增加，可溶性蛋白质含量在胁迫条件下呈现先上升后下降趋势；叶绿素含量在对照及轻度胁迫下下降，中、重度胁迫后期轻微上升；POD活性在中度、重度胁迫下总体先上升后下降，SOD活性变化平缓，CAT活性在轻度胁迫下下降更显著。
关键词： 杜鹃(Rhododendron simsii Planch.) 耐热性评价 高温胁迫 生理响应
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酶制剂在青稞馒头制作中的应用研究
《粮食与油脂 》 2025 北大核心
摘要：以青稞全麦馒头的比体积、pH及感官评分为评价指标，采用单因素的方法确定青稞馒头的加工工艺；然后以比体积、感官评分、色度为指标，通过单因素结合正交试验确定适用于青稞馒头的复合酶制剂配方。结果表明：以青稞-小麦混合粉质量为基准，青稞馒头的最佳加工工艺为青稞粉添加量40%、酵母添加量1%、发酵时间100 min、醒发时间35 min。以青稞-小麦混合粉质量为基准，最佳酶制剂配方为葡萄糖氧化酶添加量120 mg/kg、麦芽糖淀粉酶添加量18 mg/kg、纤维素酶添加量600 mg/kg。在此条件下制得青稞馒头比体积为2.12 mL/g、感官评分为90、色度为64.08,制得的馒头表面光滑、呈球形感，内部结构均匀，富有弹性，具有青稞的清香味及较强的咀嚼性，爽口不粘牙，且馒头色泽较亮。
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