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青稞AFLP体系的建立及优化

文献类型： 中文期刊

作者： 王姗姗 1 ; 刘小娇 1 ; 靳玉龙 1 ; 白婷 1 ; 朱明霞 1 ; 王波 1 ; 张文会 1 ; 张玉红 1 ;

作者机构： 1.西藏自治区农牧科学院农产品开发与食品科学研究所

关键词： 青稞;AFLP;PCR体系优化;引物筛选

期刊名称： 现代农业科技

ISSN： 1007-5739

年卷期： 2019 年 05 期

页码： 3-6

摘要： 本文以青稞为材料,对AFLP酶切连接、预扩增、选择性扩增过程进行优化。结果表明,酶切反应条件为DNA模板200 ng、限制性内切酶Eco RI/Mse I 4U、酶切时间4h;连接反应条件为连接温度16℃,T4连接酶3 U,连接时间12 h以上;预扩增反应条件为r Taq聚合酶3 U、dNTP 4 mmol/L、镁离子浓度1.00 mmol/L;选择性扩增反应条件为r Taq聚合酶4 U、d NTP 4 mmol/L、镁离子浓度1.25 mmol/L及预扩产物稀释10倍。利用优化后的AFLP体系,以藏青2000、冬青18这2个供试材料的基因组为模板,从100对引物组合中筛选出10对重复性好、稳定性强、扩增条带清晰、分布均匀、多态性高的引物组合,为青稞种质资源鉴定及遗传多样性分析提供了基础。

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