科研产出
牦牛源地衣芽孢杆菌的分离鉴定
《西藏农业科技 》 2023
摘要：为分离西藏牦牛源地衣芽孢杆菌并研究其生物学特性，为今后开发相关益生菌及其制剂奠定基础，采集西藏牦牛粪便，从粪便中分离培养、纯化病原菌，通过染色镜检、生化试验、16S rRNA PCR扩增、同源性分析、进化树构建等对分离株进行鉴定且对分离株进行耐药性试验。结果从样品中分离到3株地衣芽孢杆菌，革兰氏阳性杆菌，分别命名为XZ-1,XZ-2,XZ-3。3株分离株生化检测结果一致：可分解甘露醇、淀粉、阿拉伯糖，可还原硝酸盐，V-P试验呈阳性，不能水解明胶，不能产生红色吲哚。分离株16S rRNA PCR扩增产物电泳结果与预期结果一致，长度为1 500 bp左右。3株分离株之间同源性为96.0%～99.9%，与地衣芽孢杆菌分离株的同源性为98.3%～100%;3株分离株与地衣芽孢杆菌处于同一支，而与链球菌其他种属芽孢杆菌处于不同分支。分离株XZ-1对青霉素、氨苄西林耐药，对林可霉素中度敏感，对头孢曲松、四环素、红霉素、恩诺沙星、氯霉素、环丙沙星、阿莫西林敏感；分离株XZ-2对青霉素、氨苄西林、四环素、林可霉素耐药，对氯霉素中度敏感，对头孢曲松、红霉素、恩诺沙星、环丙沙星、阿莫西林敏感；分离株XZ-3对青霉素耐药，对氨苄西林、对林可霉素中度敏感，对头孢曲松、四环素、红霉素、恩诺沙星、氯霉素、环丙沙星、阿莫西林敏感。
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牦牛骨骼肌中特异基质金属蛋白酶及其功能相关基因的表达分析
《中国畜牧兽医 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：【目的】筛选并鉴定在牦牛骨骼肌中特异表达的基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases, MMPs）家族成员及其功能相关基因，以期为研究牦牛骨骼肌结构形成机制提供依据。【方法】采集成年公牦牛臀肌和胸肌，利用组织化学染色法（HE和Masson）分析肌纤维特征和胶原纤维数量；通过实时荧光定量PCR鉴定MMPs和基质金属蛋白酶抑制因子（TIMPs）的mRNA表达量；采用Western blotting技术和免疫组织化学法分析MMPs、Ⅰ和Ⅲ型胶原蛋白的表达量和组织分布；通过STRING网站分析MMPs及其功能相关基因之间的蛋白质互作网络；采用EnzChekTM明胶酶/胶原酶试剂盒检测牦牛臀肌和胸肌中明胶酶/胶原酶的酶活性差异。【结果】Masson染色和实时荧光定量PCR分析结果显示，牦牛臀肌中胶原纤维面积、MMP-2和MMP-14基因表达量显著低于胸肌（P＜0.05）,TIMP-3基因在牦牛臀肌中表达量显著高于胸肌（P＜0.05）。Western blotting鉴定发现，MMP-3、MMP-14、Ⅰ和Ⅲ型胶原蛋白在牦牛臀肌中的表达量极显著或显著低于胸肌（P＜0.01;P＜0.05）。免疫组织化学法分析显示，MMP-2、MMP-9、MMP-14和Ⅰ型胶原蛋白在牦牛臀肌中的表达量显著或极显著低于胸肌（P＜0.05;P＜0.01）,而MMP-16在牦牛臀肌中的表达量显著高于胸肌（P＜0.05）。蛋白质功能相关性聚类分析表明，MMP-2、MMP-14、MMP-16、TIMP-2、TIMP-3、COL1A2和COL3A1可聚为一簇，MMP-3、MMP-9和TIMP-1可聚为一簇；臀肌和胸肌中明胶酶/胶原酶的酶活性变化趋势一致，且差异不显著（P＞0.05）。【结论】MMPs家族成员及其功能相关基因在牦牛骨骼肌中广泛表达，且在臀肌和胸肌中的表达量存在差异，为进一步研究MMPs调控牦牛骨骼肌结构形成的作用机制提供了参考依据。
关键词： 牦牛 骨骼肌 基质金属蛋白酶（MMPs） 胶原蛋白
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牦牛源链球菌的分离鉴定及耐药性分析
《中国畜牧兽医 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：【目的】了解西藏拉萨地区牦牛链球菌的感染情况、致病性及其耐药性，为牦牛源链球菌的研究提供新的数据。【方法】对55份牦牛鼻拭子进行细菌分离培养、菌落形态观察、革兰氏染色镜检、生化鉴定、16S rRNA序列PCR扩增以鉴定分离菌的种属特性。通过人工感染试验小鼠评价分离菌的致病性，采用药敏纸片扩散法检测分离菌的耐药性。【结果】分离菌在血平板上长出灰白色、表面光滑的α溶血圆形菌落，革兰氏染色镜检呈链状排列的阳性球菌。分离菌可发酵葡萄糖、乳糖、海藻糖和山梨醇，不发酵麦芽糖和甘油，硝酸盐还原试验、靛基质试验、V-P试验和MR试验均呈阴性。经16S rRNA基因序列比对分析，确定有25株链球菌（Tibet-1～Tibet-25）,检出率为45.46%（25/55）,其中17株多动物链球菌，8株马链球菌。分离菌16S rRNA基因序列与NCBI上已发布的链球菌相似性在97.04%～99.77%之间，其中Tibet-1、Tibet-2、Tibet-3、Tibet-5、Tibet-9、Tibet-10、Tibet-11、Tibet-14、Tibet-15、Tibet-16、Tibet-17共11株牦牛源多动物链球菌与KM981770.1的相似性均在99%以上。分离的牦牛源链球菌可引起小鼠腹泻，对发病小鼠脏器进行增菌培养，均可分离到链球菌。药敏试验结果显示，分离菌株对多西环素、红霉素、青霉素共11种抗菌药敏感，对复方新诺明耐药。【结论】本研究分离了牦牛源多动物链球菌和牦牛源马链球菌，并对其致病性和耐药性进行相关分析，为该病的防控和治疗提供了参考依据。
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日粮蛋白质水平对育肥期牦牛生长性能、血清生化与免疫指标及瘤胃发酵特征的影响
《黑龙江畜牧兽医 》 2023 北大核心
摘要：为了研究日粮蛋白质水平对育肥牦牛的影响，试验采用非配对试验设计，将24头牦牛分成两组（低蛋白质组和高蛋白质组）,每组12头，公母各半，低蛋白质组饲喂粗蛋白水平为9.91%的日粮，高蛋白质组饲喂粗蛋白水平为13.89%的日粮，每天早晚各饲喂一次，预试期15 d,正试期56 d,测定各组的生长性能指标（初始重、末重、平均日增重、平均日采食量、料重比）、血清生化指标（总蛋白、白蛋白、球蛋白水平，葡萄糖、三酰甘油、尿素氮浓度，以及丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、碱性磷酸酶活性）、血清抗氧化指标（总抗氧化能力，超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性及丙二醛浓度）、血清免疫球蛋白[免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白G（IgG）和免疫球蛋白M（IgM）]水平、血清细胞因子[白细胞介素2（IL-2）、白细胞介素4（IL-4）、白细胞介素6（IL-6）、白细胞介素10（IL-10）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）和γ干扰素（IFN-γ）]水平、瘤胃发酵特征参数（pH值，微生物蛋白、氨态氮水平，总挥发性脂肪酸浓度，乙酸、丙酸和丁酸占比，乙酸/丙酸）及营养物质（干物质、有机物、粗蛋白、中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维）表观消化率。结果表明：两组牦牛的末重、平均日增重和平均日采食量差异不显著（P＞0.05）,高蛋白质组料重比显著高于低蛋白质组（P＜0.05）。高蛋白质组血清总蛋白和球蛋白水平显著高于低蛋白质组（P＜0.05）,尿素氮浓度和碱性磷酸酶活性极显著高于低蛋白质组（P＜0.01）,但两组间血清白蛋白水平，葡萄糖、三酰甘油浓度，以及丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶活性差异不显著（P＞0.05）。高蛋白质组血清超氧化物歧化酶活性极显著低于低蛋白质组（P＜0.01）,但两组间血清总抗氧化能力、谷胱甘肽过氧化物酶活性和丙二醛浓度差异不显著（P＞0.05）。两组血清IgA、IgG和IgM水平均差异不显著（P＞0.05）。高蛋白质组血清IL-10含量显著低于低蛋白质组（P＜0.05）,TNF-α水平极显著高于低蛋白质组（P＜0.01）;两组间血清IL-2、IL-4、IL-6和IFN-γ水平差异不显著（P＞0.05）。高蛋白质组瘤胃氨态氮水平极显著高于低蛋白质组（P＜0.01）,两组间瘤胃pH值，微生物蛋白水平，总挥发性脂肪酸浓度，乙酸、丙酸、丁酸占比及乙酸/丙酸差异不显著（P＞0.05）。高蛋白质组粗蛋白表观消化率显著高于低蛋白质组（P＜0.05）,但两组间干物质表观消化率、有机物表观消化率、中性洗涤纤维表观消化率、酸性洗涤纤维表观消化率差异不显著（P＞0.05）。说明饲喂高蛋白质水平（13.89%）日粮会降低牦牛的饲料转化效率和抗氧化功能，提高血清尿素氮浓度，不利于生长性能的提高。
关键词： 育肥期 牦牛 蛋白质水平 尿素氮 抗氧化 细胞因子
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GSTM3基因在牦牛和犏牛睾丸及附睾组织中的表达研究
《中国畜牧杂志 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：谷胱甘肽S-转移酶Mu 3（GSTM3）是一种必需的抗氧化酶，其在精子中的存在与精子的耐冷性、质量和生育能力有关。为研究GSTM3的表达与雄性牦牛繁殖功能的关系，本研究对牦牛附睾GSTM3基因进行克隆、生物信息学分析，并应用实时荧光定量PCR分析GSTM3基因在牦牛和犏牛附睾以及睾丸组织中的表达情况。结果表明，牦牛GSTM3基因CDS区序列长度为678 bp，编码225个氨基酸；GSTM3基因编码蛋白为弱酸性且不具有跨膜结构，分子式为C1204H1857N319O340S19，分子量和等电点分别为26.85 ku和7.29；牦牛GSTM3核苷酸序列与普通牛和瘤牛有较高的种间同源性，分别为99.26%和98.53%;GSTM3基因在牦牛和犏牛附睾以及睾丸组织中均有不同程度的表达，牦牛附睾和睾丸的GSTM3表达量显著高于犏牛。
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牦牛MPC1和MPC2基因克隆及其组织表达特征分析
《南方农业学报 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：[目的]明确牦牛线粒体丙酮酸载体编码基因(MPC1和MPC2)的分子生物学特性及其组织表达特征,为揭示MPC基因在牦牛适应高原环境和能量代谢中的作用机制提供理论依据.[方法]选取麦洼牦牛为研究对象,PCR扩增牦牛MPC1和MPC2基因编码区(CDS)序列,利用在线生物信息学分析软件预测其蛋白结构及理化性质,并以实时荧光定量PCR检测MPC1和MPC2基因在不同年龄(0.5、1.5和2.5岁)牦牛各组织中的表达情况.[结果]牦牛MPC1基因CDS序列长330 bp,共编码109个氨基酸残基;MPC2基因CDS序列长384 bp,共编码127个氨基酸残基.基于MPC1和MPC2基因CDS序列相似性构建的系统发育进化树显示,牦牛分别与黄牛和水牛的亲缘关系最近,与绵羊的亲缘关系最远.牦牛MPC1和MPC2蛋白均为稳定的亲水性蛋白,主要由丙氨酸和亮氨酸组成,有跨膜结构但无信号肽,均存在1个MPC结构域;其二级结构以α-螺旋为主(分别占57.80%和55.12%),三级结构模型为5xpd.1.A.MPC1和MPC2基因在2.5、1.5和0.5岁牦牛脾脏中的相对表达量均最低,其次是肾脏和肝脏,而在心脏中的相对表达量最高;MPC1和MPC2基因在不同年龄段牦牛各组织中的表达趋势不一致,可能与基因表达的组织特异性及二者在牦牛不同生长发育阶段发挥的作用不同有关.[结论]MPC1和MPC2基因在反刍动物间具有高度的保守性,其表达存在组织特异性和时序性,尤其在心脏中高表达,且编码蛋白中富含丙氨酸和亮氨酸,说明MPC1和MPC2基因在牦牛改善肉品质及适应高原环境的过程中扮演着重要角色,但二者在牦牛不同生长发育阶段发挥的作用有所差异.
关键词： 牦牛 线粒体丙酮酸载体(MPC) MPC1基因 MPC2基因 组织表达特征 高原环境
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1株牦牛源A型产气荚膜梭菌的生长特性及致病性研究
《黑龙江畜牧兽医 》 2023 北大核心
摘要：为了了解青海牦牛源产气荚膜梭菌（Clostridium perfringens,Cp）的生长特性及致病性，并计算其对感染小鼠的半数致死量(LD50),以及观察感染小鼠各器官组织的损伤情况，试验复苏牦牛源产气荚膜梭菌ZD-01（CpA ZD-01）并配制种子液，采用振荡比浊法绘制CpA ZD-01菌株的生长曲线，并研究对数期菌液的OD600值与稀释倍数和细菌数量的关系；测定其外毒素粗提取液OD280值和OD260值，计算出不同培养时间毒素蛋白含量；给小鼠腹腔注射菌液，根据小鼠死亡情况确定LD0和LD100,并计算LD50,解剖小鼠观察牦牛源CpA ZD-01菌株对各组织器官的影响。结果表明：按照5%接种量接种菌株后，＞2～10 h为对数期；菌液OD600值（y）与稀释倍数（x）的关系式为y=-0.607lnx+1.551,R~2=0.990,P＜0.05;菌液OD600值（y）与细菌数量（z）的关系式为y=4.679z-4.448,R~2=0.995,P＜0.05;在培养12 h后菌株所产生的毒素蛋白含量达到3.480 mg/mL,且第12小时为最佳产毒时间；菌株对感染小鼠的LD50为5.955×10~8 cfu/mL。急性死亡小鼠各器官无明显病理变化；慢性死亡小鼠脾脏白髓可见细胞增生，红髓淤血；大脑组织间质血管充血；肝细胞空泡变性；肾小管变性并伴有透明管型；肠道组织出现自溶现象。说明牦牛源CpA ZD-01菌株致病性较强。
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复方藏兽药翼草景香颗粒主成分代谢机理研究
《中兽医医药杂志 》 2022
摘要：运用PCA模型和代谢组学等方法,研究单次给药后复方藏兽药翼草景香颗粒主要成分在健康靶动物体内的变化规律及时量关系;运用主成分分析模式识别技术,寻找表征特定状态的生物标志物和潜在生物标志物的候选变量,从而揭示翼草景香颗粒在动物体内的生物学本质及代谢作用机制。选取健康西藏牦牛、绵羊,分成高、中、低剂量组,口服投喂复方藏药一次,另设不给药对照组,于给药前和给药后不同时段采集血样与粪样。利用GC-MS/MS对样本进行检测,检测数据分别通过GC-MS Postrun Analysis软件进行处理、NISI MS Search 2.0质谱库检索分析和Origin2018统计软件进行统计分析。由PCA得分可知,复方藏药中剂量组牦牛给药5.5 h、6.5 h和7.5 h时血样中藏药活性成分排名靠前,活性较高;复方藏药中剂量组绵羊给药0.5 h、7.5 h时和给药24.0 h时血样中藏药活性成分可以明显区分、得分最高。给药后牦牛、绵羊血液中检测出安息香醛、3-(2,6,6-三甲基-1-环己烯基)-2-丙烯醛、β-谷甾醇、2-己基-1-癸醇、三花生酸甘油酯、(±)-1,2-二棕榈精、2-乙基己酸乙烯酯、十二烯基丁二酸酐、二氢青蒿素等多种共有活性成分。该复方藏药发挥药效的主要成分包括安息香醛、3-(2,6,6-三甲基-1-环己烯基)-2-丙烯醛、β-谷甾醇等,这些共有成分可能与消炎、解热及抗肿瘤功效有关。
关键词： 牦牛 绵羊 复方藏兽药 翼草景香颗粒 血液药代动力学 GC-MS/MS
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藏羊和牦牛的生理特征及高原适应性分子遗传学研究进展
《家畜生态学报 》 2022 北大核心
摘要：被誉为"世界屋脊"的青藏高原具有低氧、低温、强紫外线等环境特征.而藏羊与牦牛是藏区重要的驯化家畜,具有低地动物难以企及的低氧耐受性,从基因层面到脏器肌肉结构等均表现出与低地动物的明显差别,是良好的畜牧、医学研究材料.该文分别从解剖学特征及分子层面综述了藏羊、牦牛等家畜在长期低温低氧环境下产生的器官组织特点、高原适应性基因,并从改良及利用藏区家畜等实际角度出发,阐述其选育有进展,以期为后续的高原适应性基因深度研究及藏区家畜改良繁育提供参考.
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牦牛CST3基因的克隆、表达及生物信息学分析
《中国畜牧杂志 》 2022 北大核心
摘要：CST3基因又名半胱氨酸蛋白酶抑制剂3,其翻译的蛋白质作用是抑制半胱氨酸蛋白酶.为研究牦牛附睾精子成熟相关机理,本研究克隆了牦牛CST3基因并进行生物信息学分析,测定其在附睾不同区域(头、体和尾)的表达.结果显示:CST3基因的编码区全长为447 bp;CST3蛋白的分子量为16.26 ku,等电点为9.23,弱碱性蛋白,存在信号肽序列;CST3蛋白序列长度为148个氨基酸,存在一个跨膜区,表达于细胞质和分泌;CST3基因在附睾头体尾均有表达,且头部的表达量远高于体部和尾部(P<0.05).本研究结论为牦牛CST3基因的理论研究提供了相关依据.
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