科研产出
牦牛乳源产色葡萄球菌的分离鉴定及毒力与耐药性分析
《中国畜牧兽医 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：[目的]了解西藏拉萨、那曲地区牦牛乳源产色葡萄球菌的耐药性,并探究其携带毒力基因和耐药基因情况.[方法]从牦牛乳汁中分离培养产色葡萄球菌,并分析其生化特性,通过PCR方法进行分子生物学鉴定并对分离株携带的毒力基因和耐药基因进行检测,采用纸片扩散法(K-B法)进行药敏试验.[结果]从66份牦牛乳汁中分离鉴定出11株产色葡萄球菌,分离率为16.67%.分离株在5%脱纤维绵羊鲜血琼脂培养基上形成边缘整齐、圆润、光滑、不透明的乳白色菌落,无溶血现象;革兰染色镜检可见呈念珠状排布的阳性球菌.生化鉴定结果显示,分离菌可发酵果糖、乳糖、甘露糖与蔗糖,硝酸盐还原反应呈阳性.16S rRNA扩增测序对比结果显示,分离菌与GenBank中的其他产色葡萄球菌相似性>98%.13种毒力基因中检出icaA、bap 2种生物膜相关调控基因,检出率均为81.82%;14种耐药基因中,耐氨基糖苷类基因aph(3')-Ⅰa、耐大环内酯类基因ermB、耐磺胺类基因sul1的检出率分别为63.64%、27.27%和9.09%.分离株对青霉素、氨苄西林和四环素耐药率分别为100.00%、63.64%和36.36%.[结论]本研究从采集自拉萨、那曲两地的66份牦牛乳样中共分离获得11株产色葡萄球菌,分离株对青霉素、氨苄西林、四环素等常见抗菌药存在不同程度的耐药性,其携带的毒力基因与耐药基因种类较少.研究结果为牦牛产色葡萄球菌的防治提供了理论依据.
关键词： 牦牛乳 产色葡萄球菌 分离鉴定 毒力基因 耐药基因
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1株牦牛源A∶L3型多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及致病性分析
《中国畜牧兽医 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：[目的]探究西藏阿里地区某养殖场内牦牛发病和死亡病因,分析其病原菌生物学特性,为有效防治该病提供参考.[方法]无菌采集死亡牦牛病变组织,根据临床症状进行实验室诊断并分离培养病原菌.通过形态学观察、生化鉴定、16S rRNA PCR扩增并测序、kmt基因鉴定、荚膜血清分型、脂多糖分型对分离株进行鉴定,并探究分离株的药物敏感性和致病性.[结果]分离株在7%血清TSA培养基中长出灰白色、透明、露滴样菌落;革兰染色镜检可见两端浓染的革兰阴性短杆菌.生化鉴定结果显示,分离株在葡萄糖、鸟氨酸脱羧酶、氧化酶、山梨醇和甘露醇生化反应管中呈阳性.荚膜血清分型及脂多糖分型结果显示,分离株为多杀性巴氏杆菌荚膜血清A型脂多糖L3型.药敏试验结果显示,分离株对羧苄西林、氨苄西林、头孢唑林、庆大霉素、呋喃妥因、头孢呋辛、丁胺卡那、米诺环素和诺氟沙星均表现敏感.致病性试验结果显示,小鼠腹腔注射0.2 mL 1×108 CFU/mL分离株菌液后,死亡率为100%(5/5),分离株具有较强致病性.[结论]本研究成功分离鉴定出1株血清A型脂多糖L3型多杀性巴氏杆菌,其对羧苄西林、氨苄西林、头孢唑林等药物敏感,致病性较强.研究结果为探究牦牛源多杀性巴氏杆菌的生物学信息和病原学特征提供了数据参考.
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基于CRISPR-Cas基因检测技术的FecB基因快速筛选方法研究及Cas核酸酶性能测定
《中国畜牧杂志 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：基于CRISPR-Cas系统的新型基因检测技术对核酸序列碱基突变检测分析具有独特的优势，但目前对单个碱基突变检测过程中的灵敏性和特异性研究较少。为此，本研究针对小尾寒羊中具有单碱基突变的多羔基因FecB进行研究，探究CRISPR-Cas系统对其检测的灵敏性和特异性。试验以小尾寒羊个体作为试验动物，提取基因组DNA，通过PCR扩增BB、++、B+型的基因序列为底物。基于Cas核酸酶的体外定点内切酶活性，针对FecB基因BB型基因序列设计了3种Cas9核酸酶sgRNA和1种Cas12a核酸酶crRNA，利用CRISPRCas9和CRISPR-Cas12a系统对不同基因型目标序列进行酶切检验，并探究Cas核酸酶的切割性能。结果表明：3种基因型的靶DNA均被切割为250 bp和100 bp 2个片段；Cas核酸酶切割性能检测结果显示，缩短酶切反应时间对提高Cas核酸酶切割特异性没有影响，降低Cas核酸酶和sgRNA浓度影响切割效率，但是不能有效改善Cas核酸酶的切割特异性，对区分FecB基因BB、++、B+基因型没有影响。本研究试验结果表明Cas核酸酶具有较高的切割稳定性和切割灵敏性，但其特异性是复杂的，受多种因素影响，且sgRNA/crRNA与靶DNA的互补配对有一定的容错性，存在单碱基错配不影响Cas核酸酶的切割活性，不能有效区分绵羊FecB基因型。本研究揭示了影响Cas核酸酶切割特异性的多重因素，为后续优化CRISPR-Cas系统中核酸酶和sgRNA/crRNA设计提供了理论基础，有助于提高基因组编辑的特异性和效率。
关键词： CRISPR-Cas系统 单碱基突变 检测性能 FecB突变 基因分型
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家养牦牛和野血牦牛空肠、盲肠及粪便微生物组成差异化分析
《中国畜牧杂志 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：为比较藏西北高原野血牦牛和家养牦牛肠道及粪便菌群组成的差异，本试验分别选取体重、体况相近且健康无病的1周岁野血牦牛和家养牦牛各10头（公母各半），于2021年10月屠宰取空肠、盲肠内容物和粪便样品，测定微生物多样性指标。结果表明：(1)与家养牦牛相比，野血牦牛空肠中，门水平放线菌门（Actinobacteria）相对丰度降低（P<0.01），变形菌门（Proteobacteria）相对丰度升高（P<0.01）；属水平梭菌属（Clostridium）和假单胞菌属（Pseudomonas）相对丰度升高（P<0.01），艰难梭菌属（Mogibacterium）、瘤胃群菌属（Ruminococcus）和低嗜盐细菌数（Dehalobacterium）相对丰度降低（P<0.05）；(2)与家养牦牛相比，野血牦牛盲肠中，门水平蓝藻门（Cyanobacteria）相对丰度升高（P<0.05）；属水平梭菌属（Clostridium）和SMB53相对丰度降低（P<0.01）,5-7N15相对丰度升高（P<0.01）,Turicibacter相对丰度降低（P<0.05）。(3)与家养牦牛相比，野血牦牛粪便中，门水平拟杆菌门（Bacteroidetes）相对丰度升高（P<0.01），螺旋体门（Spirochaetes）相对丰度降低（P<0.05）；属水平梭菌属（Clostridium）相对丰度降低（P<0.01），多雷亚（Dorea）(P<0.01)、5-7N15(P<0.05)升高。综合以上所述，野血牦牛对高海拔寒冷地区的适应能力强于家养牦牛，家养牦牛和野血牦牛肠道和粪便的菌群组成存在差异。
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放牧家畜采食量估测方法研究进展
《草原与草坪 》 2024 CSCD
摘要：放牧家畜采食量是评价草地生态系统转化效率和动物生产力的主要参数,受草地植被生长情况、环境条件、放牧方式、家畜生理特征及其瘤胃内环境等因素影响.放牧家畜采食量的准确测定一直以来都是食性研究的难点和热点问题,关系到动物营养状态的评估、补饲策略的制定以及食性理论的探索.传统采食量估测方法大多基于观察法或放牧前后牧草生物量差值法,这些方法对动物的干扰较小,但是受技术本身和适用范围的限制,如未能估测单个动物的采食量,很难适用于大范围的采食量估测.链烷烃技术和近红外技术的出现为准确测定采食量提供了前所未有的机遇,不仅能克服传统测定方法的缺点,还在准确率、适用范围(圈养动物和放牧动物)等方面优势较为明显,但由于粪便回收率和数据库完整性等因素的影响,目前应用于生物多样性较高草地的放牧动物采食量估测尚有难度.在简要总结不同方法的原理和影响因素基础上,综述了差值法、内标法、链烷烃法和近红外法在放牧家畜采食量测定方面取得的最新进展及存在的问题,并建议多种方法结合可以准确测定放牧家畜采食量,以期为制定合理的草地生态系统管理策略和实现草地可持续生态服务功能提供新思路和启发.
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一株野生贝壳革耳的生物学特性及驯化栽培
《菌物学报 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：以一株采自西藏自治区林芝市米林市的野生贝壳革耳菌株为研究对象，通过形态学观察、ITS测序分析、生物学特性研究、栽培试验对该菌株进行鉴定和驯化栽培。形态学和ITS分子生物学鉴定结果表明，该菌株为贝壳革耳Panusconchatus。生物学特性研究结果表明，贝壳革耳的最适碳源为果糖、最适氮源为酵母粉、最适p H为6.0、最适温度为30℃。驯化栽培结果表明，贝壳革耳在以60%为杂木屑的栽培料中满袋时间是22 d，原基出现时间在20–30 d，采收期为10 d，单朵鲜重是24.12 g。本研究对一株野生贝壳革耳成功分离、鉴定并完成驯化栽培试验，为贝壳革耳进一步产业化生产提供科学的参考。
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异菌脲降解菌Y-19的鉴定及其降解特性
《西北农林科技大学学报(自然科学版) 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：【目的】明确菌株Y-19的种属及其异菌脲降解特性，挖掘青藏高原地区异菌脲高效降解微生物资源，以期解决西藏地区大棚土壤环境中异菌脲的残留问题，确保该地区大棚种植土壤及蔬菜的质量安全。【方法】以异菌脲高效降解菌株Y-19为研究对象，采用多相分类方法开展该菌株的种属鉴定，采用GC-ECD法和GC-MS法分析该菌株的异菌脲降解途径及降解特征，分别以异菌脲初始质量浓度、温度、pH值、接种量和NaCl质量分数等为因子，探究该菌株的最佳降解环境条件，并采用比较基因组学挖掘该菌株的异菌脲降解基因。【结果】多相分类鉴定结果表明，菌株Y-19为烟碱拟节杆菌(Paenarthrobacter nicotinovorans),其能够将异菌脲先降解为N-(3,5-二氯苯基)-2,4-二氧代咪唑烷和异丙基氨基甲酸，其次再将N-(3,5-二氯苯基)-2,4-二氧代咪唑烷降解为N-[[(3,5-二氯苯基)氨基]羰基]甘氨酸，最后将N-[[(3,5-二氯苯基)氨基]羰基]甘氨酸降解为3,5-二氯苯胺和氨基甲酸。菌株Y-19的最佳异菌脲降解环境条件为：温度25℃、pH 7.0,NaCl质量分数0.0%～1.0%、接种量5%和异菌脲初始质量浓度100 mg/L。在最佳条件下菌株Y-19可在14 h完全降解100 mg/L异菌脲，异菌脲降解率为100%,最终生成48.8 mg/L 3,5-二氯苯胺。菌株Y-19含有高度相似的异菌脲降解基因ipaH,ddaH和duaH,上述基因编码的水解酶能够使异菌脲及其降解产物结构中的酰胺键(―CO―N=,包括肽键―CO―NH―)发生水解反应。【结论】烟碱拟节杆菌(Paenarthrobacter nicotinovorans)Y-19是降解异菌脲效率较快的菌株，节杆菌属(Arthrobacter)和拟节杆菌属(Paenarthrobacter)可能是参与异菌脲降解为3,5-二氯苯胺的主要细菌种类。
关键词： 异菌脲 农药残留 3,5-二氯苯胺 降解特性 拟节杆菌属 降解途径 降解基因
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雅鲁藏布江下游弧唇裂腹鱼的遗传多样性和种群结构
《中国水产科学 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：雅鲁藏布江是青藏高原上最大的河流之一,也是生物多样性保护工作的热点区域,弧唇裂腹鱼(Schizothorax curvilabiatus)主要分布于雅鲁藏布江下游干支流水域,是当地的代表性鱼类。本研究以雅鲁藏布江下游3个江段的弧唇裂腹鱼为研究对象,利用特异性位点扩增片段测序技术(SLAF-seq)开发了单核苷酸多态性(SNP)位点,分析了雅江墨脱干流、帕隆藏布和察隅河3个弧唇裂腹鱼地理群体的遗传多样性和种群结构。遗传多样性结果表明,除等位基因数外的其他指标中(杂合度、Nei’s多样性指数、多态性信息含量、香农指数),墨脱种群的遗传多样性最高,察隅种群次之,帕隆种群最低;连锁不平衡分析表明帕隆种群受到的自然正向选择较大,其适应环境的能力更强;遗传分化分析表明墨脱种群与帕隆种群、察隅种群之间存在低程度的遗传分化(0.05 全文链接
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白菜型油菜硫苷含量与组分分析
《中国农业科学 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：【目的】我国是白菜型油菜起源地之一，分析评价其品质对开发利用白菜型油菜资源具有重要意义。【方法】本研究以菜籽为研究对象，经研磨提取和离子交换柱处理后，得到硫苷提取液，采用高效液相色谱（HPLC）法，对323份白菜型油菜的硫苷含量及组分进行测定分析。【结果】参试材料的硫苷总含量为26.19—238.21μmol·g-1，均值为137.22μmol·g-1。共检测到9种硫苷组分，其中包含了5种脂肪族硫苷，分别为2-羟基-3-丁烯基硫苷、4-甲亚砜丁基硫苷、2-羟基-4-戊烯基硫苷、3-丁烯基硫苷和4-戊烯基硫苷；3种吲哚族硫苷，包括4-羟基-3-吲哚甲基硫苷、3-吲哚甲基硫苷和4-甲氧基-3-吲哚甲基硫苷；检测到1种芳香族硫苷，为苯乙基硫苷。白菜型油菜硫苷以脂肪族硫苷为主，3-丁烯基硫苷为主要成分，平均含量122.68μmol·g-1，占脂肪族硫苷含量的93.71%，占总硫苷含量的89.40%。比较不同生态区材料的总硫苷含量发现：长江流域>黄淮区>西藏>甘肃，其中，甘肃材料的4-羟基-3-吲哚甲基硫苷和3-吲哚甲基硫苷含量较其他3个生态区高，但3-丁烯基硫苷含量为4个生态区最低。吲哚族硫苷含量因材料感温性的差异而变化较大，强冬性(11.50μmol·g-1)>冬性(7.60μmol·g-1)>半冬性(6.77μmol·g-1)>春性(3.87μmol·g-1)。2-羟基-3-丁烯基硫苷与吲哚族硫苷的含量也因种质不同而有较大变化，筛选到6份高吲哚族硫苷种质(含量为5.86—13.81μmol·g-1),3份2-羟基-3-丁烯基硫苷种质(含量为50.14—68.38μmol·g-1)。【结论】白菜型油菜的硫苷成分主要是脂肪族硫苷，其中3-丁烯基硫苷为脂肪族硫苷主要组分。同时，硫苷组分的含量也因种质的基因型不同有较大变化，如超高硫苷、高吲哚硫苷及高2-羟基-3-丁烯基硫苷特殊材料等。
关键词： 白菜型油菜 种子 硫苷 组分分析 高效液相色谱法(HPLC)
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GC-MS/GC-O-MS结合PLSR分析新型青稞白酒的关键香气物质
《食品工业科技 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：为明晰新型青稞白酒的香气特点，探究不同工艺对酒体风味的影响，以青稞为原料，在清香型白酒工艺基础上引入高温堆积工艺后生产得到一种新型青稞白酒。采用感官定量描述法（quantitative descriptive analysis,QDA）对三个新型青稞白酒原酒样品进行分析，并使用液液萃取法（liquid-liquid extraction,LLE）结合气相色谱-质谱联用仪（gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS）以及气相色谱-嗅闻-质谱联用仪（gas chromatography-olfactometry-mass spectrometry,GC-O-MS）对其中香气活性物质进行分析，并采用偏最小二乘回归（partial least squares regression,PLSR）结合分析。三个原酒样品中共检出139种挥发性物质，57种香气化合物，共有11种香气化合物的香气活性值（odor active value,OAV）大于1。经二轮发酵的原酒中挥发性化合物总含量为一轮发酵后原酒的1.4倍，酒的粮香、糟香增加，辛酸乙酯、己酸乙酯、异戊酸乙酯以及愈创木酚是相对应的关键香气化合物。经过高温堆积工艺的原酒糟香、粮香降低，花香更加明显，与未经高温堆积的酒样相比，丁酸乙酯、己酸乙酯、辛酸乙酯的OAV降低，乙酸异戊酯、愈创木酚、4-甲基愈创木酚的OAV升高。高温堆积后乙酸异戊酯浓度提升，酒样花香增强，丁酸、己酸乙酯、辛酸乙酯、癸酸乙酯浓度降低，酒样粮香降低。
关键词： 青稞白酒 风味 感官定量描述分析 气相色谱-质谱法 香气活性值
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