西藏光核桃SRAP-PCR反应体系的优化和引物筛选

谭江平; 曾秀丽; 廖明安; 邱利娜; 王玉霞; 次仁卓嘎; 《北方园艺 》 2011 北大核心

摘要：以西藏12份光核桃种质为试材,采用正交设计,从dNTPs、Mg~(2+)、引物、模板DNA和Taq DNA聚合酶5种因素5个水平来优化SRAP-PCR反应体系,并对引物进行了筛选。结果表明:光核桃25μL的SRAP反应体系的最佳组分包括2.5μL 10×buffer,0.35 mmol/L dNTPs,1.5 mmol/L Mg~(2+),0.4μmol/L引物,20 ng模板DNA和2.5 U Taq DNA聚合酶。各因素对扩增反应结果均有不同影响,其中以dNTPs浓度影响最大,模板DNA的影响最小。应用该体系从40个引物组合中共筛选出扩增条带清晰、多态性丰富的SRAP引物组合23个。这一体系的建立及多态性引物组合的筛选为利用SRAP标记技术进行光核桃遗传多样性研究提供了依据。

关键词： 光核桃 SRAP 正交设计 体系优化 引物筛选