文献类型： 中文期刊

作者： 李蓉 ¹ ; 富国文 ¹ ; 曾琴 ¹ ; 吴姣 ¹ ; 袁嘉芮 ¹ ; 刘亚波 ¹ ; 四朗玉珍 ² ; 樊月圆 ¹ ;

作者机构： 1.云南农业大学动物医学院

2.西藏自治区农牧科学院畜牧兽医研究所

关键词： 羊传染性脓疱病毒(ORFV);趋化因子结合蛋白(CBP);生物信息学;原核表达

期刊名称： 中国畜牧兽医

ISSN： 1671-7236

年卷期： 2024 年 008 期

页码： 3506-3518

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】克隆羊传染性脓疱病毒(ORFV)口唇和内脏感染株趋化因子结合蛋白(CBP)基因并进行生物信息学分析及原核表达，为后续研究CBP基因在ORFV免疫逃逸机制中的作用提供基础数据。【方法】以患病羔羊口唇结痂和小肠提取的DNA为模板设计特异性引物，进行PCR扩增并克隆测序，对表达的CBP基因遗传进化关系及蛋白理化性质、结构特点进行分析；利用原核表达系统pGEX-4T-1构建重组质粒pGEX-4T-1-CBP-K、pGEX-4T-1-CBP-N并转化大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞，利用SDS-PAGE检测蛋白的表达，并通过Western blotting对蛋白进行抗原性分析。【结果】经测序，ORFV口唇感染株CBP基因全长873 bp,内脏感染株CBP基因全长846 bp,且后者在第217 bp处有24 bp碱基的丢失。系统进化树显示，口唇与内脏感染株不属于同一进化分支，遗传距离较远；口唇感染株CBP基因与中国吉林分离株亲缘关系最近；内脏感染株CBP基因与马来西亚分离株亲缘关系最近。口唇感染株CBP基因编码291个氨基酸，内脏感染株CBP基因编码282个氨基酸，蛋白二级结构均主要由α-螺旋和无规则卷曲构成，三级结构有5处差异，主要是α-螺旋和β-折叠的变化。试验成功构建了原核表达质粒pGEX-4T-1-CBP-K和pGEX-4T-1-CBP-N,其在大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞中以包涵体形式表达CBP融合蛋白，分子质量约为60 ku。【结论】本研究内脏感染株与口唇感染株相比，存在24 bp的缺失，并成功构建原核表达质粒pGEX-4T-1-CBP-K和pGEX-4T-1-CBP-N,可在大肠杆菌中表达CBP融合蛋白。本研究结果为揭示CBP在ORFV与宿主互作中发挥的作用提供参考，也可为寻找新的羊传染性脓疱防治方法提供依据。