文献类型： 中文期刊

作者： 樊月圆 ¹ ; 王瑾艺 ¹ ; 刘亚波 ¹ ; 茶金龙 ² ; 白卫兵 ¹ ; 四朗玉珍 ³ ; 富国文 ¹ ;

作者机构： 1.云南农业大学动物医学院

2.云南农业职业技术学院

3.西藏自治区农牧科学院畜牧兽医研究所

关键词： 产气荚膜梭菌;环介导等温扩增技术;可视化检测

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2025 年 55 卷 001 期

页码： 48-55

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 本研究旨在基于环介导等温扩增（LAMP）技术建立一种快速诊断羊源产气荚膜梭菌的可视化快速检测方法。首先以产气荚膜梭菌cpa基因为靶基因，构建重组质粒；建立LAMP检测技术并对各反应条件进行优化，随后开展敏感性、特异性、重复性试验，扩增产物可视化及临床样品检测。结果显示，本研究成功建立了羊源产气荚膜梭菌的LAMP检测方法，筛选出最适温度、Mg²⁺浓度、Bst DNA聚合酶和dNTPs添加量以及内外引物最佳浓度比。并通过浊度法或添加HNB、SYBR GreenⅠ、钙黄绿素染料显色，实现可视化。使用该方法对6种常见肠道菌进行检测，仅对产气荚膜梭菌具有良好的特异性；以DNA为模板时，其灵敏度与荧光定量PCR法相近，是普通PCR的100倍；以菌液为模板时，其灵敏度比普通PCR法高出1～2个数量级，兼具便捷快速的特点。结果表明，本研究成功建立了羊源产气荚膜梭菌LAMP法，该方法可用于临床样品的快速检测。