疥螨Sar s14.3过敏原蛋白原核表达及间接ELISA方法的建立

李鑫; 唐志强; 张浩吉; 唐文强; 党志胜; 孙悦翔; 李静; 叶碧锦; 黄福强; 《中国人兽共患病学报 》 2023 北大核心 CSCD

摘要：目的 预测疥螨猪变种转录组中过敏原蛋白，对Sar s 14.3过敏原蛋白进行生物特性分析、原核表达并建立间接ELISA诊断方法。方法 利用转录组测序（RNA-Seq）及BLAST、ProtParam、I-TASSER和COMPARE等软件和数据库对疥螨猪变种转录组中的过敏原组分进行预测并对疥螨Sar s 14.3过敏原蛋白序列进行理化性质分析、结构分析、同源性分析和间接ELISA诊断方法的建立。结果 在疥螨猪变种的18 980个转录本中共预测出390条过敏原序列，且随机匹配可能性值（E-value）为0的序列有28条。Sar s 14.3过敏原蛋白的理论相对分子质量为38 kDa,蛋白较稳定，为亲水性蛋白；二级结构以无规卷曲和β-折叠为主，其氨基酸序列与疥螨其他变种主要过敏原组分14蛋白序列相似性不低于99.76%,而与尘螨属螨虫的相似性最高为73.08%,与现行的形态学分类系统一致。所建立的间接ELISA诊断方法的最佳包被抗原浓度为2μg/mL,血清最佳稀释倍数是1∶400。结论 本试验成功预测了疥螨猪变种转录组中的过敏原序列并克隆、表达了疥螨猪变种Sar s 14.3蛋白，初步预测了其分子特征，并以该过敏原蛋白为基础成功建立了一种快速的间接ELISA检测方法，可用于疥螨病的初步诊断和流行病学调查。

关键词： 疥螨猪变种 转录组 生物信息学 Sar s 14.3过敏原 ELISA