利用实时荧光定量PCR检测外源基因拷贝数体系的建立

奥斯曼; 张冬杰; 巴桑珠扎; 赵丽; 刘娣; 《中国畜牧兽医文摘 》 2015

摘要：黑素皮质素受体4(Melanocortin receptor 4,MC4R)基因是影响猪生长肥育性能的主效基因之一,是参与调控体重、采食和能量平衡的关键信号物质。动物转基因技术目前主要应用于生产珍贵蛋白、基因治疗、器官移植、动物品种改良和建立疾病模型等方面。目前人们已经获得了如羊、牛、小鼠、猪等多种转基因克隆动物。确定外源基因的拷贝数和整合位点是对后续外源基因功能探讨和表型研究的前提条件。本研究将MC4R基因转入猪PK15细胞中,挑单克隆,通过3对特异性引物对转染细胞做PCR扩增检测出阳性细胞,实时荧光定量PCR检测外源基因拷贝数,初步建立了检测外源基因拷贝数的实验体系。

关键词： MC4R基因 PK15细胞 阳性细胞 实时荧光定量PCR 外源基因拷贝数