科研产出
1株羊源伪结核棒状杆菌的分离鉴定及耐药性分析
《中国畜牧兽医 》 2025 北大核心
摘要：【目的】确定云南宜良地区某养殖场疑似患伪结核病病羊的病原，并探究其耐药性及致病性，为该病的诊断和治疗提供理论依据。【方法】通过患病羊临床症状初步判断病因，无菌采集病料，分离纯化病原菌后对其形态特征、培养特性和生化特性进行鉴定；利用PCR扩增分离株16S rRNA基因序列并进行测序比对分析；通过药敏试验、耐药基因检测和小鼠致病性试验探究分离株的耐药性和致病性。【结果】分离株在血琼脂平板上生长状态良好，菌落呈黄白色、不透明样，在普通营养琼脂和普通营养肉汤内生长不良；革兰染色镜检结果显示，菌体为球杆状或棒状，为革兰阳性菌。生化鉴定结果显示，分离株的葡萄糖、尿素试验呈阳性，乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖、西蒙氏枸橼酸盐、硫化氢、靛基质、硝酸盐还原试验、甲基红（MR）试验和VP试验均呈阴性。16S rRNA序列比对结果显示，分离株与NCBI数据库中的伪结核棒状杆菌16S rRNA基因序列相似性>99%,鉴定其为伪结核棒状杆菌。药敏试验结果显示，分离株对链霉素、庆大霉素、新霉素表现中介，对氨曲南、头孢他啶、多黏菌素表现耐药。耐药基因检测结果显示，该分离株携带耐药基因Sul2、Sul3、blaTEM及blaCTX-M。动物致病性试验结果显示，腹腔、皮下接种4.4×10～8 CFU/mL分离菌后可引起小鼠死亡，死亡率达100%。皮下接种96 h后可见小鼠皮下出现脓肿，脓液中可分离出伪结核棒状杆菌。【结论】本试验成功分离鉴定出1株羊源伪结核棒状杆菌，明确了患病羊病原，该分离株对小鼠致病性较强。研究结果为伪结核棒状杆菌感染羊的诊断、流行病学调查以及治疗提供参考依据。
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1株牦牛源停乳链球菌全基因组测序及生物学特性分析
《中国兽医学报 》 2025 北大核心 CSCD
摘要：对西藏那曲市牦牛乳汁样本进行细菌分离鉴定、药敏试验、毒力基因检测及致病性试验，以评估分离菌株的生物学特性，同时通过全基因组学测序进行毒力因子和耐药基因等分子生物学信息分析，并通过PCR对毒力基因进行验证。结果显示，从牦牛乳汁中分离出1株停乳链球菌，其菌落形态为针尖大小、边缘光滑、呈乳白色。该菌株对多种抗生素(青霉素G、头孢类、环丙沙星、四环素、红霉素等)敏感。毒力基因检测结果显示，该菌株携带了6种关键毒力基因(cyl、eno、scpB、bca、bac和napr),这些基因可能与其致病性密切相关。致病性试验中，小鼠在感染后精神萎靡、活动减少，但在观察期内未发生死亡。剖检发现脾脏、肾脏、肝脏肿大及肺组织病理变化，提示该菌株具有一定的致病潜能但非高致死性。全基因组测序数据显示，该菌株基因组长为4 079 280 bp, GC含量为39.41%,3 964个编码基因被预测，其中604个被注释为毒力因子，另有28个基因突变可能增强了其病原致病能力。通过CARD数据库注释，发现存在2个PatA抗性基因和2个lmrp抗性基因，揭示了其潜在的耐药机制。本研究通过全基因组测序技术结合生物信息学分析方法，揭示了牦牛源停乳链球菌的基因组特征及其耐药性和致病性机制，为深入探索牦牛源停乳链球菌的致病机理、耐药机制以及分子进化规律提供重要的科学依据。
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藏羊源产气荚膜梭菌的分离鉴定与药物敏感性分析
《中国畜牧兽医 》 2025 北大核心
摘要：[目的]对采集自西藏拉萨市曲水县疑似产气荚膜梭菌感染致死病例进行病原检测并进行体外药物敏感性分析.[方法]无菌采集病死藏羊肺脏、肝脏、心脏、脾脏、肾脏、血液、胃内容物、肠内容物等12份病料样品,通过厌氧培养进行病原菌的分离培养和纯化,对分离纯化后的菌株进行革兰染色镜检、生化鉴定、16S rRNA基因PCR鉴定,并进行基因序列测定和遗传进化分析,通过PCR检测分离株的毒素基因携带情况并进行毒素分型,进一步开展分离株的体外药物敏感性研究.[结果]试验从12份藏羊病料样品中分离获得10株疑似菌,分离株在RMC培养基中生长旺盛,在TSC培养基中呈中间黑、边缘白的菌落,在5%脱纤维绵羊血平板上呈现双溶血环,革兰染色为阳性杆菌,初步判定为产气荚模梭菌,命名为QS-1~QS-10.生化鉴定结果显示,分离株乳糖、蔗糖、D-核糖、鼠李糖、葡萄糖、麦芽糖、木糖、甘露醇、山梨醇、明胶、尿素、牛乳发酵试验呈阳性,松三糖、棉子糖、阿拉伯糖、M-R、V-P、甘油、水杨苷、硫化氢、过氧化氢、尿素、吲哚试验结果呈阴性.分离株16S rRNA基因序列与产气荚膜梭菌参考株的相似性为98.30%~99.90%,与产气荚膜梭菌参考株处于同一分支,而与大肠杆菌、沙门菌等处于不同分支.毒素基因检测结果显示,8株分离株仅携带cpa基因,为A型产气荚膜梭菌;2株分离株携带cpa和etx基因,为D型产气荚膜梭菌.分离株均对诺氟沙星、氧氟沙星、环丙沙星、氨苄西林、羧苄西林、哌拉西林表现敏感或中介,对其余15种药物均存在不同程度的耐药性,其中9株存在多重耐药性,5重以上耐药的菌株占80.00%,分离株QS-3耐药数量多达13种.[结论]本研究从猝死藏羊病料中分离出10株产气荚膜梭菌,其中2株为D型、8株为A型,分离株耐药情况严重.研究结果为当地藏羊产气荚膜梭菌病的治疗和预防提供了数据指导.
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牦牛源A型产气荚膜梭菌的分离鉴定及生物学特性研究
《中国畜牧兽医 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：[目的]2023年4月至2023年5月,西藏拉萨市多地出现牦牛严重腹泻、便血甚至死亡的现象.试验旨在确定牦牛腹泻的病原菌并研究其生物学特性,以期为该地区牦牛腹泻病的防治提供参考.[方法]采集新鲜牦牛腹泻粪便样品进行厌氧培养,通过培养特性及染色镜检进行初步鉴定;对可疑阳性菌株进行生化特性、多重PCR毒素基因分型及cpe、netB、cpb2毒素鉴定,并进行cpa、cpb2、16S rRNA基因的遗传进化分析、部分分离株生长曲线测定及动物致病性试验;采用K-B法测定分离株的体外药物敏感性,统计不同分离株的多重耐药结果.[结果]从样品中分离纯化得到8株分离菌,在厌氧培养基中生长旺盛,在TSC培养基、5%脱纤维绵羊血平板、卵黄琼脂培养基上均呈现与产气荚膜梭菌相似的典型菌落,革兰染色为紫色大杆菌,初步判定为产气荚膜梭菌,命名为XZ-1~XZ-8.分离株生化检测结果与产气荚膜梭菌相符;分离株均携带cpa和cpb2基因,为A型产气荚膜梭菌;16S rRNA基因分析结果显示,8株分离株与产气荚膜梭菌参考株的相似性为97.3%~100%,在系统进化树中处于同一分支,而与屎肠球菌、大肠杆菌参考株处于不同分支;分离株cpa和cpb2基因存在一定的变异性.生长曲线显示,3株分离株(XZ-1、XZ-4、XZ-7)生长规律基本一致,其中0~4 h为迟缓期,4~8 h为对数期,8~22 h为稳定期,22 h后开始进入衰亡期.动物致病性试验结果显示,分离株对昆明小鼠具有较强的致病性.分离株对苯唑西林、红霉素、氯霉素、氧氟沙星、米诺环素、头孢哌酮、利福平及罗红霉素敏感,对青霉素、哌拉西林、羧苄西林、麦迪霉素、头孢曲松等22种药物均存在不同程度的耐药性,存在多重耐药性,其中XZ-7株耐药数量多达11种,6重以上耐药的菌株占75.0%.[结论]本研究成功从拉萨严重腹泻、血便牦牛粪样中分离出8株A型产气荚膜梭菌,分离株对小鼠具有较强的致病性,对青霉素、哌拉西林、羧苄西林等药物存在不同程度的耐药性.研究结果为该地区牦牛腹泻病防控提供了参考依据.
关键词： 牦牛 产气荚膜梭菌 分离鉴定 生长曲线 动物致病性 耐药性
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小菜蛾抗药性及其生物防治研究进展
《西藏农业科技 》 2024
摘要：小菜蛾作为一种在全球范围内普遍存在的农业害虫，对蔬菜生产构成了严重威胁。目前，针对小菜蛾的防治策略主要包括化学防治、农业防治和生物防治等方法。然而，由于化学农药的大量使用，小菜蛾已经展现出了越来越强的抗药性，这使得其防治变得愈加困难。通过分析国内外的小菜蛾防治技术，可以发现生物防治方法在有效控制小菜蛾的同时，并不会引发害虫的抗药性问题。为了更加清晰地了解小菜蛾造成的危害性，从小菜蛾的发生概况与原因、抗药性的产生及其管理措施、抗药性监测等方面进行了综述。目前，小菜蛾的生物防治主要利用的是真菌、细菌、病毒以及天敌等生物因素。通过对最新研究进展的综述，展望了未来小菜蛾生物防治的发展前景。
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牦牛源表皮葡萄球菌的分离鉴定和生物学特性研究
《中国兽医杂志 》 2024 北大核心
摘要：为了解西藏拉萨地区牦牛源表皮葡萄球菌的携带情况，本试验随机采集了26份拉萨地区牦牛鼻拭子样品，采用细菌分离纯化和形态学鉴定、生化鉴定以及16S rDNA测序和同源性比对分析对分离菌株进行鉴定；选取19种常用抗生素，利用K-B药敏纸片扩散法对分离菌株进行药敏试验；检测四环素类耐药基因tet(M)和tet(K),林可胺类、氯霉素类、截短侧耳素类、恶唑烷酮类、链阳霉素A类多药耐药基因cfr,β-内酰胺类耐药基因mecA和酰胺醇类耐药基因fexA五种耐药基因，研究分离菌株的耐药性；进行攻毒试验，检测分离菌株的致病性。结果显示，分离得到1株表皮葡萄球菌，命名为LZ-1;LZ-1对氨苄西林、青霉素和红霉素耐药，对多黏菌素B、头孢他啶和克林霉素中介，对头孢曲松、四环素和新霉素等13种抗生素敏感；共检测出tet(M)、tet(K)和mecA三种耐药基因；该菌株对小鼠致病性不强。结果表明，本试验分离出1株牦牛源表皮葡萄球菌，有一定的耐药性，可为其防治提供一定的参考。
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牦牛源链球菌的分离鉴定及耐药性分析
《中国畜牧兽医 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：【目的】了解西藏拉萨地区牦牛链球菌的感染情况、致病性及其耐药性，为牦牛源链球菌的研究提供新的数据。【方法】对55份牦牛鼻拭子进行细菌分离培养、菌落形态观察、革兰氏染色镜检、生化鉴定、16S rRNA序列PCR扩增以鉴定分离菌的种属特性。通过人工感染试验小鼠评价分离菌的致病性，采用药敏纸片扩散法检测分离菌的耐药性。【结果】分离菌在血平板上长出灰白色、表面光滑的α溶血圆形菌落，革兰氏染色镜检呈链状排列的阳性球菌。分离菌可发酵葡萄糖、乳糖、海藻糖和山梨醇，不发酵麦芽糖和甘油，硝酸盐还原试验、靛基质试验、V-P试验和MR试验均呈阴性。经16S rRNA基因序列比对分析，确定有25株链球菌（Tibet-1～Tibet-25）,检出率为45.46%（25/55）,其中17株多动物链球菌，8株马链球菌。分离菌16S rRNA基因序列与NCBI上已发布的链球菌相似性在97.04%～99.77%之间，其中Tibet-1、Tibet-2、Tibet-3、Tibet-5、Tibet-9、Tibet-10、Tibet-11、Tibet-14、Tibet-15、Tibet-16、Tibet-17共11株牦牛源多动物链球菌与KM981770.1的相似性均在99%以上。分离的牦牛源链球菌可引起小鼠腹泻，对发病小鼠脏器进行增菌培养，均可分离到链球菌。药敏试验结果显示，分离菌株对多西环素、红霉素、青霉素共11种抗菌药敏感，对复方新诺明耐药。【结论】本研究分离了牦牛源多动物链球菌和牦牛源马链球菌，并对其致病性和耐药性进行相关分析，为该病的防控和治疗提供了参考依据。
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西藏牦牛牛支原体的分离鉴定及其生长特性、耐药性分析
《中国农业大学学报 》 2020 北大核心 CSCD
摘要：为确定引起西藏牦牛常发多发肺炎的细菌病原体,采集145份西藏牦牛鼻腔粘液,通过病原分离培养、菌落形态观察、生化试验和PCR鉴定等方法进行细菌检测;通过OD630和pH变化对分离株进行生长曲线测定;采用K-B纸片法进行药物敏感性试验.结果显示:从145份牦牛鼻腔粘液中分离得到10株牛支原体;分离株菌落形态和生化试验结果均符合牛支原体的生物学特性;通过PCR分别扩增得到238bp的uvrC特异性基因与1 500bp16SrRNA基因.10株分离株间的uvrC特异性基因和16SrRNA基因序列同源性较高,均与国际标准株PG45有高度同源性,uvrC特异性基因序列和16SrRNA基因序列与国际标准株PG45的同源性分别为98.4%~100%和99.1%~99.9%.生长曲线测定表明,分离株在PPLO培养基中培养24h内为迟缓期,培养42h后开始进入稳定期,78h后开始进入衰亡期;3个分离株培养物的平均pH随着培养时间延长不断降低,其中24~42h期间pH下降最快,随后下降速度减慢,至78h后几乎不再变化.药物敏感性试验表明,分离株对大环内酯类、氨基糖苷类和林可胺类等药物均存在不同程度的耐药,但对强力霉素和卡那霉素敏感或中度敏感.
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拉萨市牦牛肉源金黄色葡萄球菌的鉴定及其耐药性分析
《南方农业学报 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：【目的】明确西藏拉萨市牦牛肉源金黄色葡萄球菌常见肠毒素(SEs)基因分布特征及其多重耐药性,为牦牛肉源产SEs金黄色葡萄球菌的快速鉴定及其防控提供科学依据。【方法】通过Baird-Parker显色培养筛选及Nuc基因扩增鉴定从拉萨市牦牛肉样品中分离获得金黄色葡萄球菌,利用PCR鉴定分析金黄色葡萄球菌中9种常见SEs基因的分布特征,并采用K-B纸片扩散法对产SEs金黄色葡萄球菌进行多重耐药性分析。【结果】从100份牦牛肉样品中分离获得29株金黄色葡萄球菌,其SEs基因鉴定结果表明,9种SEs基因检测出6种(SEB、SEC、SEE、SEG、SHE和SEI),有3种(SEA、SED和SEJ)未检出。其中,SEG基因检出率79.31%,SEC和SEI基因检出率均为68.97%,SEB基因检出率55.17%,SHE基因检出率51.72%,SEE基因检出率3.45%。29株金黄色葡萄球菌对青霉素(P)、氨苄西林(AMP)、克拉霉素(CLR)、红霉素(E)和磺胺甲恶唑(SMZ)的耐药率较高,分别为79.31%、65.52%、58.62%、51.73%和31.04%;对阿米卡星(AK)、替卡西林(TIM)、苯唑西林(OX)、环丙沙星(CIP)和四环素(TE)的耐药率较低,分别为10.35%、6.90%、3.45%、3.45%和3.45%;对头孢西丁(FOX)、头孢他啶(CAZ)、头孢噻肟(CTX)、庆大霉素(CN)和氯霉素(C)尚未产生耐药性。29株金黄色葡萄球菌共表现出13种耐药谱,多重耐药率高达93.1%(27/29),其优势耐药谱为AMP/P、SMZ/CLR/E和AMP/P/CLR/E。【结论】西藏拉萨市牦牛肉源金黄色葡萄球菌含有SEG、SEC、SEI、SEB、SEH和SEE等多种SEs基因,且对青霉素类、大环内酯类和磺胺类等多种抗菌药物已产生较强的耐药性。
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