科研产出
玉米赤霉烯酮致彭波半细毛羊睾丸支持细胞增殖凋亡、氧化应激及NAC保护机制
《畜牧兽医学报 》 2025 北大核心 CSCD
摘要：旨在研究玉米赤霉烯酮（zearalenone, ZEA）对彭波半细毛羊睾丸支持细胞的生殖毒性及N-乙酰半胱氨酸（NAC）对睾丸支持细胞抗氧化应激的保护机制。本试验选取体质健康3月龄雄性彭波半细毛羊(（13.87±0.46） kg)的睾丸组织用以分离支持细胞进行体外染毒试验，试验组ZEA染毒剂量分别为25、50、100、200μmol·L-1,对照组（NC组）仅添加0.1%DMSO,每组3个重复，筛选ZEA试验浓度。采用组合酶消化法、差速贴壁法和免疫荧光染色（IF）法进行彭波半细毛羊睾丸组织支持细胞分离、纯化培养及特异性抗体GATA4和Vimentin鉴定。CCK-8法、EdU法检测睾丸组织支持细胞活率及增殖能力。qRT-PCR和Western blot技术从转录和翻译水平检测细胞增殖（pcna）、凋亡（bax、caspase3、caspase9）和氧化应激（cat、gsh-px、sod1）等相关基因和蛋白的表达变化规律以及NAC的保护作用。结果发现，组合酶消化法和差速贴壁法能够获得满足ZEA染毒试验的SCs,随ZEA染毒浓度升高，SCs细胞活性和细胞增殖数量逐渐下降，200μmol·L-1 ZEA处理组SCs活性和细胞增殖数量极显著低于NC组（P<0.01）;细胞增殖基因pcna的mRNA相对表达量和蛋白表达量均极显著低于NC组（P<0.01）;促凋亡相关基因bax、caspase3、caspase9的mRNA相对表达量极显著高于NC组（P<0.01）,CASPASE3蛋白表达量极显著高于NC组（P<0.01）,BAX、CASPASE9蛋白表达量显著高于NC组（P<0.05）;抗凋亡基因bcl-2的mRNA相对表达量和蛋白表达量显著低于NC组（P<0.05）;氧化应激相关基因gsh-px和sod1的mRNA相对表达量极显著高于NC组（P<0.01）,cat的mRNA相对表达量显著高于NC组（P<0.05）,CAT、SOD1蛋白表达量极显著于NC组（P<0.01）。N-乙酰半胱氨酸（NAC）预处理后，与NC组对比，试验组cleaved-CASPASE-9、cleaved-CASPASE-3蛋白表达量极显著下降（P<0.01）,BAX蛋白表达量显著下降（P<0.05）,BCL-2蛋白表达量显著上升（P<0.05）。综上表明，ZEA暴露能够对彭波半细毛羊产生生殖毒性，抑制睾丸SCs增殖，促进SCs凋亡，导致SCs发生氧化损伤，而NAC对ZEA诱导的彭波半细毛羊睾丸SCs氧化损伤具有保护作用。
关键词： 彭波半细毛羊 玉米赤霉烯酮 睾丸 支持细胞 增殖凋亡 氧化应激 N-乙酰半胱氨酸
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HSPA2和SPATA6在彭波半细毛羊睾丸组织中的细胞定位及表达差异分析
《草业科学 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：热休克蛋白A2 （HSPA2）是热休克蛋白HSP70家族重要成员，能够促进睾丸支持细胞增殖；精子发生相关基因6 （SPATA6）能够调控肌球蛋白合成的微丝运输系统，影响精子细胞骨架形成。在雄性哺乳动物生殖过程中，两者均起重要作用。为研究HSPA2和SPATA6在雄性彭波半细毛羊生殖过程中的表达规律和细胞定位，以不同年龄阶段（3月龄、12月龄和3岁龄）彭波半细毛羊睾丸组织为研究对象，运用实时荧光定量PCR （real time quantitative PCR,qRT-PCR）、Western blot和免疫组织化学染色法（IHC）从转录和翻译水平检测了HSPA2和SPATA6在不同年龄阶段彭波半细毛羊睾丸组织的表达水平和分布模式，分析预测HSPA2和SPATA6在彭波半细毛羊睾丸发育和精子发生过程中的调控作用。结果表明：12月龄和3岁龄彭波半细毛羊睾丸组织中HSPA2 mRNA的相对表达量以及蛋白表达量极显著高于3月龄（P ＜0.01）;12月龄SPATA6 mRNA的相对表达量以及蛋白表达量极显著高于3月龄（P ＜0.01），显著高于3岁龄（P ＜0.05）。不同年龄阶段彭波半细毛羊睾丸组织的支持细胞和间质细胞中HSPA2和SPATA6蛋白均有分布。初步推断，HSPA2和SPATA6的表达水平变化在调控彭波半细毛羊精子发生过程和促进精子成熟中具有重要作用。
关键词： 彭波半细毛羊 热休克蛋白A2 精子发生相关基因6 睾丸 表达定位 免疫组化 蛋白质免疫印迹
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GSTM3基因在牦牛和犏牛睾丸及附睾组织中的表达研究
《中国畜牧杂志 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：谷胱甘肽S-转移酶Mu 3（GSTM3）是一种必需的抗氧化酶，其在精子中的存在与精子的耐冷性、质量和生育能力有关。为研究GSTM3的表达与雄性牦牛繁殖功能的关系，本研究对牦牛附睾GSTM3基因进行克隆、生物信息学分析，并应用实时荧光定量PCR分析GSTM3基因在牦牛和犏牛附睾以及睾丸组织中的表达情况。结果表明，牦牛GSTM3基因CDS区序列长度为678 bp，编码225个氨基酸；GSTM3基因编码蛋白为弱酸性且不具有跨膜结构，分子式为C1204H1857N319O340S19，分子量和等电点分别为26.85 ku和7.29；牦牛GSTM3核苷酸序列与普通牛和瘤牛有较高的种间同源性，分别为99.26%和98.53%;GSTM3基因在牦牛和犏牛附睾以及睾丸组织中均有不同程度的表达，牦牛附睾和睾丸的GSTM3表达量显著高于犏牛。
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