玉米赤霉烯酮致彭波半细毛羊睾丸支持细胞增殖凋亡、氧化应激及NAC保护机制

朱爱文; 王健; 朱戈辉; 刘海霞; 平措班旦; 王军; 德庆卓嘎; 闫伟; 韩大勇; 《畜牧兽医学报 》 2025 北大核心 CSCD

摘要：旨在研究玉米赤霉烯酮（zearalenone, ZEA）对彭波半细毛羊睾丸支持细胞的生殖毒性及N-乙酰半胱氨酸（NAC）对睾丸支持细胞抗氧化应激的保护机制。本试验选取体质健康3月龄雄性彭波半细毛羊(（13.87±0.46） kg)的睾丸组织用以分离支持细胞进行体外染毒试验，试验组ZEA染毒剂量分别为25、50、100、200μmol·L^-1,对照组（NC组）仅添加0.1%DMSO,每组3个重复，筛选ZEA试验浓度。采用组合酶消化法、差速贴壁法和免疫荧光染色（IF）法进行彭波半细毛羊睾丸组织支持细胞分离、纯化培养及特异性抗体GATA4和Vimentin鉴定。CCK-8法、EdU法检测睾丸组织支持细胞活率及增殖能力。qRT-PCR和Western blot技术从转录和翻译水平检测细胞增殖（pcna）、凋亡（bax、caspase3、caspase9）和氧化应激（cat、gsh-px、sod1）等相关基因和蛋白的表达变化规律以及NAC的保护作用。结果发现，组合酶消化法和差速贴壁法能够获得满足ZEA染毒试验的SCs,随ZEA染毒浓度升高，SCs细胞活性和细胞增殖数量逐渐下降，200μmol·L^-1 ZEA处理组SCs活性和细胞增殖数量极显著低于NC组（P<0.01）;细胞增殖基因pcna的mRNA相对表达量和蛋白表达量均极显著低于NC组（P<0.01）;促凋亡相关基因bax、caspase3、caspase9的mRNA相对表达量极显著高于NC组（P<0.01）,CASPASE3蛋白表达量极显著高于NC组（P<0.01）,BAX、CASPASE9蛋白表达量显著高于NC组（P<0.05）;抗凋亡基因bcl-2的mRNA相对表达量和蛋白表达量显著低于NC组（P<0.05）;氧化应激相关基因gsh-px和sod1的mRNA相对表达量极显著高于NC组（P<0.01）,cat的mRNA相对表达量显著高于NC组（P<0.05）,CAT、SOD1蛋白表达量极显著于NC组（P<0.01）。N-乙酰半胱氨酸（NAC）预处理后，与NC组对比，试验组cleaved-CASPASE-9、cleaved-CASPASE-3蛋白表达量极显著下降（P<0.01）,BAX蛋白表达量显著下降（P<0.05）,BCL-2蛋白表达量显著上升（P<0.05）。综上表明，ZEA暴露能够对彭波半细毛羊产生生殖毒性，抑制睾丸SCs增殖，促进SCs凋亡，导致SCs发生氧化损伤，而NAC对ZEA诱导的彭波半细毛羊睾丸SCs氧化损伤具有保护作用。

关键词： 彭波半细毛羊 玉米赤霉烯酮 睾丸 支持细胞 增殖凋亡 氧化应激 N-乙酰半胱氨酸