科研产出
牦牛源A型产气荚膜梭菌的分离鉴定及生物学特性研究
《中国畜牧兽医 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：[目的]2023年4月至2023年5月,西藏拉萨市多地出现牦牛严重腹泻、便血甚至死亡的现象.试验旨在确定牦牛腹泻的病原菌并研究其生物学特性,以期为该地区牦牛腹泻病的防治提供参考.[方法]采集新鲜牦牛腹泻粪便样品进行厌氧培养,通过培养特性及染色镜检进行初步鉴定;对可疑阳性菌株进行生化特性、多重PCR毒素基因分型及cpe、netB、cpb2毒素鉴定,并进行cpa、cpb2、16S rRNA基因的遗传进化分析、部分分离株生长曲线测定及动物致病性试验;采用K-B法测定分离株的体外药物敏感性,统计不同分离株的多重耐药结果.[结果]从样品中分离纯化得到8株分离菌,在厌氧培养基中生长旺盛,在TSC培养基、5%脱纤维绵羊血平板、卵黄琼脂培养基上均呈现与产气荚膜梭菌相似的典型菌落,革兰染色为紫色大杆菌,初步判定为产气荚膜梭菌,命名为XZ-1~XZ-8.分离株生化检测结果与产气荚膜梭菌相符;分离株均携带cpa和cpb2基因,为A型产气荚膜梭菌;16S rRNA基因分析结果显示,8株分离株与产气荚膜梭菌参考株的相似性为97.3%~100%,在系统进化树中处于同一分支,而与屎肠球菌、大肠杆菌参考株处于不同分支;分离株cpa和cpb2基因存在一定的变异性.生长曲线显示,3株分离株(XZ-1、XZ-4、XZ-7)生长规律基本一致,其中0~4 h为迟缓期,4~8 h为对数期,8~22 h为稳定期,22 h后开始进入衰亡期.动物致病性试验结果显示,分离株对昆明小鼠具有较强的致病性.分离株对苯唑西林、红霉素、氯霉素、氧氟沙星、米诺环素、头孢哌酮、利福平及罗红霉素敏感,对青霉素、哌拉西林、羧苄西林、麦迪霉素、头孢曲松等22种药物均存在不同程度的耐药性,存在多重耐药性,其中XZ-7株耐药数量多达11种,6重以上耐药的菌株占75.0%.[结论]本研究成功从拉萨严重腹泻、血便牦牛粪样中分离出8株A型产气荚膜梭菌,分离株对小鼠具有较强的致病性,对青霉素、哌拉西林、羧苄西林等药物存在不同程度的耐药性.研究结果为该地区牦牛腹泻病防控提供了参考依据.
关键词： 牦牛 产气荚膜梭菌 分离鉴定 生长曲线 动物致病性 耐药性
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1株牦牛源A型产气荚膜梭菌的生长特性及致病性研究
《黑龙江畜牧兽医 》 2023 北大核心
摘要：为了了解青海牦牛源产气荚膜梭菌（Clostridium perfringens,Cp）的生长特性及致病性，并计算其对感染小鼠的半数致死量(LD50),以及观察感染小鼠各器官组织的损伤情况，试验复苏牦牛源产气荚膜梭菌ZD-01（CpA ZD-01）并配制种子液，采用振荡比浊法绘制CpA ZD-01菌株的生长曲线，并研究对数期菌液的OD600值与稀释倍数和细菌数量的关系；测定其外毒素粗提取液OD280值和OD260值，计算出不同培养时间毒素蛋白含量；给小鼠腹腔注射菌液，根据小鼠死亡情况确定LD0和LD100,并计算LD50,解剖小鼠观察牦牛源CpA ZD-01菌株对各组织器官的影响。结果表明：按照5%接种量接种菌株后，＞2～10 h为对数期；菌液OD600值（y）与稀释倍数（x）的关系式为y=-0.607lnx+1.551,R~2=0.990,P＜0.05;菌液OD600值（y）与细菌数量（z）的关系式为y=4.679z-4.448,R~2=0.995,P＜0.05;在培养12 h后菌株所产生的毒素蛋白含量达到3.480 mg/mL,且第12小时为最佳产毒时间；菌株对感染小鼠的LD50为5.955×10~8 cfu/mL。急性死亡小鼠各器官无明显病理变化；慢性死亡小鼠脾脏白髓可见细胞增生，红髓淤血；大脑组织间质血管充血；肝细胞空泡变性；肾小管变性并伴有透明管型；肠道组织出现自溶现象。说明牦牛源CpA ZD-01菌株致病性较强。
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