科研产出
羊源产气荚膜梭菌LAMP检测方法的建立
《中国兽医科学 》 2025 北大核心 CSCD
摘要：本研究旨在基于环介导等温扩增（LAMP）技术建立一种快速诊断羊源产气荚膜梭菌的可视化快速检测方法。首先以产气荚膜梭菌cpa基因为靶基因，构建重组质粒；建立LAMP检测技术并对各反应条件进行优化，随后开展敏感性、特异性、重复性试验，扩增产物可视化及临床样品检测。结果显示，本研究成功建立了羊源产气荚膜梭菌的LAMP检测方法，筛选出最适温度、Mg2+浓度、Bst DNA聚合酶和dNTPs添加量以及内外引物最佳浓度比。并通过浊度法或添加HNB、SYBR GreenⅠ、钙黄绿素染料显色，实现可视化。使用该方法对6种常见肠道菌进行检测，仅对产气荚膜梭菌具有良好的特异性；以DNA为模板时，其灵敏度与荧光定量PCR法相近，是普通PCR的100倍；以菌液为模板时，其灵敏度比普通PCR法高出1～2个数量级，兼具便捷快速的特点。结果表明，本研究成功建立了羊源产气荚膜梭菌LAMP法，该方法可用于临床样品的快速检测。
全文链接
请求原文
拉萨市羊产气荚膜梭菌的分子流行病学调查
《西藏农业科技 》 2025
摘要：为了掌握拉萨市羊产气荚膜梭菌的流行情况及毒素型分布情况，试验从拉萨市曲水县、当雄县采集羊组织、粪便样品共计172份，提取样品基因组DNA,进行16 S rRNA基因PCR检测和毒素基因分型鉴定。结果显示：曲水县和当雄县羊产气荚膜梭菌的总体阳性率为29.65%(51/172),其中A型阳性率为26.74%(46/172),D型阳性率为2.91%(5/172)。从样品来源看，曲水县组织样品中阳性率为87.50%(7/8),粪便样品中阳性率为50.00%(32/64),总阳性率为54.16%(39/72);当雄县组织样品阳性率为0(0/7),粪便样品阳性率为12.90%(12/93),总阳性率为12.00%(12/100)。
全文链接
请求原文
藏羊源产气荚膜梭菌的分离鉴定与药物敏感性分析
《中国畜牧兽医 》 2025 北大核心
摘要：[目的]对采集自西藏拉萨市曲水县疑似产气荚膜梭菌感染致死病例进行病原检测并进行体外药物敏感性分析.[方法]无菌采集病死藏羊肺脏、肝脏、心脏、脾脏、肾脏、血液、胃内容物、肠内容物等12份病料样品,通过厌氧培养进行病原菌的分离培养和纯化,对分离纯化后的菌株进行革兰染色镜检、生化鉴定、16S rRNA基因PCR鉴定,并进行基因序列测定和遗传进化分析,通过PCR检测分离株的毒素基因携带情况并进行毒素分型,进一步开展分离株的体外药物敏感性研究.[结果]试验从12份藏羊病料样品中分离获得10株疑似菌,分离株在RMC培养基中生长旺盛,在TSC培养基中呈中间黑、边缘白的菌落,在5%脱纤维绵羊血平板上呈现双溶血环,革兰染色为阳性杆菌,初步判定为产气荚模梭菌,命名为QS-1~QS-10.生化鉴定结果显示,分离株乳糖、蔗糖、D-核糖、鼠李糖、葡萄糖、麦芽糖、木糖、甘露醇、山梨醇、明胶、尿素、牛乳发酵试验呈阳性,松三糖、棉子糖、阿拉伯糖、M-R、V-P、甘油、水杨苷、硫化氢、过氧化氢、尿素、吲哚试验结果呈阴性.分离株16S rRNA基因序列与产气荚膜梭菌参考株的相似性为98.30%~99.90%,与产气荚膜梭菌参考株处于同一分支,而与大肠杆菌、沙门菌等处于不同分支.毒素基因检测结果显示,8株分离株仅携带cpa基因,为A型产气荚膜梭菌;2株分离株携带cpa和etx基因,为D型产气荚膜梭菌.分离株均对诺氟沙星、氧氟沙星、环丙沙星、氨苄西林、羧苄西林、哌拉西林表现敏感或中介,对其余15种药物均存在不同程度的耐药性,其中9株存在多重耐药性,5重以上耐药的菌株占80.00%,分离株QS-3耐药数量多达13种.[结论]本研究从猝死藏羊病料中分离出10株产气荚膜梭菌,其中2株为D型、8株为A型,分离株耐药情况严重.研究结果为当地藏羊产气荚膜梭菌病的治疗和预防提供了数据指导.
全文链接
请求原文
牦牛源A型产气荚膜梭菌的分离鉴定及生物学特性研究
《中国畜牧兽医 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：[目的]2023年4月至2023年5月,西藏拉萨市多地出现牦牛严重腹泻、便血甚至死亡的现象.试验旨在确定牦牛腹泻的病原菌并研究其生物学特性,以期为该地区牦牛腹泻病的防治提供参考.[方法]采集新鲜牦牛腹泻粪便样品进行厌氧培养,通过培养特性及染色镜检进行初步鉴定;对可疑阳性菌株进行生化特性、多重PCR毒素基因分型及cpe、netB、cpb2毒素鉴定,并进行cpa、cpb2、16S rRNA基因的遗传进化分析、部分分离株生长曲线测定及动物致病性试验;采用K-B法测定分离株的体外药物敏感性,统计不同分离株的多重耐药结果.[结果]从样品中分离纯化得到8株分离菌,在厌氧培养基中生长旺盛,在TSC培养基、5%脱纤维绵羊血平板、卵黄琼脂培养基上均呈现与产气荚膜梭菌相似的典型菌落,革兰染色为紫色大杆菌,初步判定为产气荚膜梭菌,命名为XZ-1~XZ-8.分离株生化检测结果与产气荚膜梭菌相符;分离株均携带cpa和cpb2基因,为A型产气荚膜梭菌;16S rRNA基因分析结果显示,8株分离株与产气荚膜梭菌参考株的相似性为97.3%~100%,在系统进化树中处于同一分支,而与屎肠球菌、大肠杆菌参考株处于不同分支;分离株cpa和cpb2基因存在一定的变异性.生长曲线显示,3株分离株(XZ-1、XZ-4、XZ-7)生长规律基本一致,其中0~4 h为迟缓期,4~8 h为对数期,8~22 h为稳定期,22 h后开始进入衰亡期.动物致病性试验结果显示,分离株对昆明小鼠具有较强的致病性.分离株对苯唑西林、红霉素、氯霉素、氧氟沙星、米诺环素、头孢哌酮、利福平及罗红霉素敏感,对青霉素、哌拉西林、羧苄西林、麦迪霉素、头孢曲松等22种药物均存在不同程度的耐药性,存在多重耐药性,其中XZ-7株耐药数量多达11种,6重以上耐药的菌株占75.0%.[结论]本研究成功从拉萨严重腹泻、血便牦牛粪样中分离出8株A型产气荚膜梭菌,分离株对小鼠具有较强的致病性,对青霉素、哌拉西林、羧苄西林等药物存在不同程度的耐药性.研究结果为该地区牦牛腹泻病防控提供了参考依据.
关键词： 牦牛 产气荚膜梭菌 分离鉴定 生长曲线 动物致病性 耐药性
全文链接
请求原文
1株牦牛源A型产气荚膜梭菌的生长特性及致病性研究
《黑龙江畜牧兽医 》 2023 北大核心
摘要：为了了解青海牦牛源产气荚膜梭菌（Clostridium perfringens,Cp）的生长特性及致病性，并计算其对感染小鼠的半数致死量(LD50),以及观察感染小鼠各器官组织的损伤情况，试验复苏牦牛源产气荚膜梭菌ZD-01（CpA ZD-01）并配制种子液，采用振荡比浊法绘制CpA ZD-01菌株的生长曲线，并研究对数期菌液的OD600值与稀释倍数和细菌数量的关系；测定其外毒素粗提取液OD280值和OD260值，计算出不同培养时间毒素蛋白含量；给小鼠腹腔注射菌液，根据小鼠死亡情况确定LD0和LD100,并计算LD50,解剖小鼠观察牦牛源CpA ZD-01菌株对各组织器官的影响。结果表明：按照5%接种量接种菌株后，＞2～10 h为对数期；菌液OD600值（y）与稀释倍数（x）的关系式为y=-0.607lnx+1.551,R~2=0.990,P＜0.05;菌液OD600值（y）与细菌数量（z）的关系式为y=4.679z-4.448,R~2=0.995,P＜0.05;在培养12 h后菌株所产生的毒素蛋白含量达到3.480 mg/mL,且第12小时为最佳产毒时间；菌株对感染小鼠的LD50为5.955×10~8 cfu/mL。急性死亡小鼠各器官无明显病理变化；慢性死亡小鼠脾脏白髓可见细胞增生，红髓淤血；大脑组织间质血管充血；肝细胞空泡变性；肾小管变性并伴有透明管型；肠道组织出现自溶现象。说明牦牛源CpA ZD-01菌株致病性较强。
全文链接
请求原文
首页上一页1下一页尾页
